Come eseguire diluizioni seriali

Contenuto

• stadi
• Metodo 1 Eseguire una diluizione semplice
• Metodo 2 Calcola il fattore di diluizione finale e la concentrazione

In chimica, una diluizione consiste nel ridurre la concentrazione di una data soluzione. Una diluizione seriale è semplicemente una diluizione ripetuta di una soluzione originale per amplificare rapidamente il fattore di diluizione. Questo tipo di diluizione viene spesso eseguita durante esperimenti che richiedono soluzioni altamente diluite e alta precisione, come quelle che coinvolgono curve di concentrazione su una scala di registro o quelle che consentono di calcolare la densità dei batteri in determinati terreni. Sono molto spesso eseguiti in biochimica, microbiologia, farmacologia o chimica.

stadi

Metodo 1 Eseguire una diluizione semplice

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   Determina il giusto liquido di diluizione (o diluente). La scelta del diluente è molto importante e dipende dalla soluzione che si desidera diluire. Il diluente è spesso acqua distillata, ma non è sistematico. Pertanto, con una soluzione contenente batteri o cellule, viene invece utilizzato un terreno di coltura. Per la diluizione seriale, lo stesso diluente viene utilizzato in tutte le provette.
   • Se non sei sicuro di quale diluente usare, chiedi aiuto a una persona competente o cerca su Internet cosa devono fare le persone per un'esperienza simile.

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   Preparare diverse provette contenenti 9 ml di un liquido di diluizione. Queste provette verranno utilizzate per effettuare diluizioni successive. Il principio è semplice, prenderete un campione della soluzione di partenza e la trasferirete alla prossima provetta, quindi prenderete un campione di questa provetta per inserirla nella prossima, ecc.
   • Prima di iniziare le diluizioni, è consigliabile identificare in anticipo le provette per evitare confusione in seguito.
   • In ogni provetta, avrai una concentrazione dieci inferiore a quella precedente. La prima provetta conterrà una soluzione diluita nel decimo, secondo, centesimo, terzo, millesimo e così via. Determinare in anticipo il numero di diluizioni per evitare di produrre più provette del necessario e di sprecare il diluente inutilmente.

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   Prepara una provetta con la soluzione madre. Metti almeno 2 ml. La quantità minima di soluzione madre per diluizione seriale è di un millilitro. Lasciare 2 ml per un'eventuale seconda diluizione. Questo tubo di soluzione madre, è possibile contrassegnarlo come "SM".
   • Prima di iniziare una diluizione seriale, mescolare bene la soluzione di partenza.

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   Fai la prima diluizione. Pipettare 1 ml della soluzione madre nella provetta etichettata "SM" e trasferire questa quantità nella provetta etichettata. 1/10 che contiene già 9 ml di liquido di diluizione. Mescolare per ottenere una soluzione omogenea. In questa provetta ora ci sono 10 ml di soluzione: 1 ml di soluzione madre e 9 ml di liquido di diluizione. Questa nuova soluzione è dieci volte meno concentrata della precedente.

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   Eseguire la seconda diluizione. Nella seconda diluizione seriale, disegnerai 1 ml della soluzione di provetta etichettata 1/10 e lo verserai nel tubo 1/100 che contiene già 9 ml di liquido di diluizione. Il tubo 1/10 sarebbe stato ben miscelato prima del campionamento. Una volta effettuato il trasferimento, mescolare bene la provetta 1/100. La soluzione dal tubo contrassegnato 1/10 è 10 volte più concentrato di quello della provetta etichettata 1/100.

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   Ripetere questa manipolazione se necessario. Questa procedura può essere ripetuta tutte le volte che si desidera fino al raggiungimento della diluizione desiderata. Per un esperimento che coinvolge curve di concentrazione, è quindi possibile ottenere una serie di soluzioni con diluizioni all'unità, il decimo (1/10), il centesimo (1/100) o il millesimo (1/1000).

Metodo 2 Calcola il fattore di diluizione finale e la concentrazione

1. 
   

   
   Calcola il rapporto la diluizione finale dopo la diluizione seriale. Il rapporto totale di diluizione si ottiene moltiplicando il fattore di diluizione per se stesso tante volte quante sono le diluizioni. Matematicamente, la formula è la seguente: D_t = D₁ x D₂ x D₃ x ... x D_ncon D_t che rappresenta il fattore di diluizione totale e D_n, il rapporto della diluizione.
   • Supponiamo quindi di eseguire una diluizione 1/10 di un liquido 4 volte di seguito. Nella formula, sostituire il fattore di diluizione con il suo valore: D_t = 10 x 10 x 10 x 10 = 10.000
   • Il fattore di diluizione finale della quarta provetta nella diluizione seriale è 1/10 000. La concentrazione della soluzione dell'ultima provetta è ora 10.000 volte inferiore a quella della soluzione originale.

2. 
   

   
   Determinare la concentrazione di una soluzione dopo la diluizione. Per trovare la concentrazione finale di una soluzione dopo la diluizione seriale, è necessario conoscere la concentrazione iniziale. La formula è quindi: C_finale = C_iniziale/ Acon C_finale che rappresenta la concentrazione terminale della soluzione diluita, C_iniziale, la concentrazione della soluzione madre e D, il rapporto della diluizione determinato in anticipo.
   • Quindi, se diluisci una soluzione cellulare con una concentrazione di 1.000.000 di cellule per ml e il tuo rapporto di diluizione è stato impostato su 1.000, quale sarà la concentrazione finale del tuo campione diluito?
   • Usa la formula:
     • C_finale = C_iniziale/ A
     • C_finale = 1 000 000/1 000
     • C_finale = 1000 cellule / ml

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   Prestare attenzione alle unità utilizzate. Quando si eseguono i calcoli, verificare sempre di utilizzare le stesse unità. Pertanto, se si parte da una concentrazione di cellule per ml, il risultato finale sarà anche in celle per ml. Se la concentrazione iniziale è in parti per milione (ppm), la concentrazione finale sarà in parti per milione.